合作单位：同济医院妇产科
脂质体-C-erbB2反义脱氧寡核苷酸对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及化疗药物敏感性的影响
作者：沈梅 单位： 来源：上海医科大学妇产科医院 编者：
【摘要】 目的 探讨脂质体-C-erbB2反义脱氧寡核苷酸（C-erbB2 S-ODNs）对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及顺铂（DDP）敏感性的影响。方法 对20只裸鼠建立人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型，分为对照组(腹腔注射无菌水)、观察组(腹腔注射脂质体-C-erbB2 S-ODNs)、化疗组(腹腔注射无菌水及DDP)、观察＋化疗组(腹腔注射脂质体-C-erbB2 S-ODNs及DDP)。治疗期间观测裸鼠体重变化，治疗结束后取瘤体称重进行电镜观察。结果 观察组抑瘤率为37％，电镜下可见细胞异染色质增多，线粒体退化。观察＋化疗组抑瘤率可达50％。观察组裸鼠体重无明显改变。结论 C-erbB2反义基因治疗在卵巢癌基因治疗中有一定作用，与化疗联合应用可以取得更好的治疗效果。
【关键词】 原癌基因 寡核苷酸类，反义 卵巢肿瘤 疾病模型，动物
Effect of Liposome-C-erbB2 Antisense Oligodeoxynucleotides on the Growth and
the Chemotherapeutic Drug Sensitivity of Human Ovarian Cancer Transplanted
in the Omentum of Nude Mice SHEN Mei，FENG Youji，ZHOU Xianrong，et al. Gynecology and Obstetrics Hospital，Shanghai Medical University，Shanghai 200011
【Abstract】 Objective To investigate the effects of liposome-C-erbB2
antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotides（S-ODNs）on the growth and
the chemotherapeutic drug sensitivity of human ovarian cancer transplanted in
the omentum of nude mice. Methods Human ovarian cancer transplanted in the
omentum of nude mice model was established, then divided into four groups：
control group, experimental group, chemotherapeutic group, and experimental
+chemotherapeutic group. Different treatments were given respectively. The
weight of nude mice was observed and the morphology of tumor cells was
observed by electromicroscope. ResultsThe growth inhibitory rate in the
experimental group was 37％. There were more heterochromatins in the treated
tumor cells. The growth inhibitory rate in the experimental+ chemotherapeutic
group was increased to 50％. There was no obvious alteration in the weight
of experimental group. Conclusion The data in this study suggest that antisense
therapy is an useful method of gene therapy in ovarian cancer；Moreover, it could enhance the effectiveness of antitumor drug.
【Key words】 Proto-oncogenes Oligonucleotides, antisense Ovarian neoplasms Disease models, animal
近年来，国内外学者对卵巢癌的反义基因治疗进行了探索，在体外细胞水平取得了一定的效果［1，2］。本研究采用体内治疗，观察脂质体-C-ErbB2反义脱氧寡核苷酸(C-erbB2 S-ODNs)对卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及顺铂(DDP)敏感性的影响。
资料与方法
一、资料
SKOV3细胞由美国ATCC提供。C-erbB2 S-ODNs由中国科学院上海细胞生物学研究所合成，序列为5′-CAGCTCCATGGTGCT-3′，并用硫代磷酸修饰(S-ODNs)。脂质体由中国科学院上海生物化学研究所提供。DDP为山东齐鲁制药厂产品。BALC/C遗传背景的裸鼠由上海市肿瘤研究所动物室提供。透射电镜为JEM-1200EX型。
二、方法
1.裸鼠饲养：本研究所选用的裸鼠均为4～6周龄雌鼠，体重(19.4±1.4) g，由上海市肿瘤研究所动物室饲养。
2.人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型的建立：（1）SKOV3细胞卵巢癌裸鼠皮下瘤形成：先将SKOV3细胞接种于裸鼠背部皮下，6周后取出瘤体，切成约2 mm×2 mm×2 mm大小瘤块，再从中选出大小接近的20块，浸于生理盐水中备用。（2）肿瘤网膜移植：受体裸鼠共20只，依次用1.25％戊巴比妥钠（45 mg/kg体重，腹腔注射）麻醉后打开腹腔，找到脾区网膜，将瘤块半包埋缝植其上，之后缝合腹腔［3］。
3.脂质体-C-erbB2 S-ODNs体内转染：肿瘤网膜移植术后第5天，将20只裸鼠称重后按随机数字分为4组，每组5只，分别给予以下处理：对照组与化疗组：腹腔注射无菌水0.6 ml；观察组与观察＋化疗组：腹腔注射脂质体-C-erbB2 S-ODNs 0.6 ml（内含脂质体400 μg,C-erbB2 S-ODNs 40 μg），每周注射1次，共3次。
4.DDP治疗：上述处理结束后第2天，分别给予化疗组和观察＋化疗组裸鼠腹腔注射DDP 0.25 mg，继续饲养6天后取瘤体称重，并进行电镜观察。
5.肿瘤超微结构的观察：将所取肿瘤标本于2.5％戊二醛中固定2小时，0.1M磷酸缓冲液冲洗后再用1％氧化锇后固定2小时。梯度乙醇脱水后用618还氧树脂没透包埋，LKBⅠ型超薄切片机切片。将切片用铀和铅双重染色后置于电镜下观察、摄片。
结 果
一、脂质体-C-erbB2S-ODNs及DDP对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长的作用
观察组与对照组比较，肿瘤体积缩小，抑瘤率为37％。化疗组抑瘤率为23％。观察＋化疗组抑瘤率达50％。见表1。
表1 3组裸鼠脂质体-C-erbB2 S-ODNs及DDP
对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长的作用
二、各组裸鼠体重的变化
观察组与对照组比较，裸鼠的体重无明显变化，而经DDP治疗后的裸鼠体重减轻。见表2。
表2 各组裸鼠脂质体-C-erbB2 S-ODNs不同作用时间 裸鼠体重的变化(g,±s)
【关键词】 原癌基因 寡核苷酸类，反义 卵巢肿瘤 疾病模型，动物
Effect of Liposome-C-erbB2 Antisense Oligodeoxynucleotides on the Growth and
the Chemotherapeutic Drug Sensitivity of Human Ovarian Cancer Transplanted
in the Omentum of Nude Mice SHEN Mei，FENG Youji，ZHOU Xianrong，et al. Gynecology and Obstetrics Hospital，Shanghai Medical University，Shanghai 200011
【Abstract】 Objective To investigate the effects of liposome-C-erbB2
antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotides（S-ODNs）on the growth and
the chemotherapeutic drug sensitivity of human ovarian cancer transplanted in
the omentum of nude mice. Methods Human ovarian cancer transplanted in the
omentum of nude mice model was established, then divided into four groups：
control group, experimental group, chemotherapeutic group, and experimental
+chemotherapeutic group. Different treatments were given respectively. The
weight of nude mice was observed and the morphology of tumor cells was
observed by electromicroscope. ResultsThe growth inhibitory rate in the
experimental group was 37％. There were more heterochromatins in the treated
tumor cells. The growth inhibitory rate in the experimental+ chemotherapeutic
group was increased to 50％. There was no obvious alteration in the weight
of experimental group. Conclusion The data in this study suggest that antisense
therapy is an useful method of gene therapy in ovarian cancer；Moreover, it could enhance the effectiveness of antitumor drug.
【Key words】 Proto-oncogenes Oligonucleotides, antisense Ovarian neoplasms Disease models, animal
近年来，国内外学者对卵巢癌的反义基因治疗进行了探索，在体外细胞水平取得了一定的效果［1，2］。本研究采用体内治疗，观察脂质体-C-ErbB2反义脱氧寡核苷酸(C-erbB2 S-ODNs)对卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及顺铂(DDP)敏感性的影响。
资料与方法
一、资料
SKOV3细胞由美国ATCC提供。C-erbB2 S-ODNs由中国科学院上海细胞生物学研究所合成，序列为5′-CAGCTCCATGGTGCT-3′，并用硫代磷酸修饰(S-ODNs)。脂质体由中国科学院上海生物化学研究所提供。DDP为山东齐鲁制药厂产品。BALC/C遗传背景的裸鼠由上海市肿瘤研究所动物室提供。透射电镜为JEM-1200EX型。
二、方法
1.裸鼠饲养：本研究所选用的裸鼠均为4～6周龄雌鼠，体重(19.4±1.4) g，由上海市肿瘤研究所动物室饲养。
2.人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型的建立：（1）SKOV3细胞卵巢癌裸鼠皮下瘤形成：先将SKOV3细胞接种于裸鼠背部皮下，6周后取出瘤体，切成约2 mm×2 mm×2 mm大小瘤块，再从中选出大小接近的20块，浸于生理盐水中备用。（2）肿瘤网膜移植：受体裸鼠共20只，依次用1.25％戊巴比妥钠（45 mg/kg体重，腹腔注射）麻醉后打开腹腔，找到脾区网膜，将瘤块半包埋缝植其上，之后缝合腹腔［3］。
3.脂质体-C-erbB2 S-ODNs体内转染：肿瘤网膜移植术后第5天，将20只裸鼠称重后按随机数字分为4组，每组5只，分别给予以下处理：对照组与化疗组：腹腔注射无菌水0.6 ml；观察组与观察＋化疗组：腹腔注射脂质体-C-erbB2 S-ODNs 0.6 ml（内含脂质体400 μg,C-erbB2 S-ODNs 40 μg），每周注射1次，共3次。
4.DDP治疗：上述处理结束后第2天，分别给予化疗组和观察＋化疗组裸鼠腹腔注射DDP 0.25 mg，继续饲养6天后取瘤体称重，并进行电镜观察。
5.肿瘤超微结构的观察：将所取肿瘤标本于2.5％戊二醛中固定2小时，0.1M磷酸缓冲液冲洗后再用1％氧化锇后固定2小时。梯度乙醇脱水后用618还氧树脂没透包埋，LKBⅠ型超薄切片机切片。将切片用铀和铅双重染色后置于电镜下观察、摄片。
结 果
一、脂质体-C-erbB2S-ODNs及DDP对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长的作用
观察组与对照组比较，肿瘤体积缩小，抑瘤率为37％。化疗组抑瘤率为23％。观察＋化疗组抑瘤率达50％。见表1。
表1 3组裸鼠脂质体-C-erbB2 S-ODNs及DDP
对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长的作用
| 组别 | 裸鼠 只数 | 癌瘤重量 （mg,  ±s） | 抑瘤率 （％） |
| 对照组 | 5 | 118±54 | |
| 观察组 | 5 | 74±29 | 37 |
| 化疗组 | 5 | 91±65 | 23 |
| 观察＋化疗组 | 5 | 59±44 | 50 |
观察组与对照组比较，裸鼠的体重无明显变化，而经DDP治疗后的裸鼠体重减轻。见表2。
表2 各组裸鼠脂质体-C-erbB2 S-ODNs不同作用时间 裸鼠体重的变化(g,±s)
| 组别 | 裸鼠 只数 | 脂质体-C-erbB2 S-ODNs 作用时间（天） | P值 | 分享：||||
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